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                    上海遠慕生物科技有限公司

                    核酸電泳(RNA電泳與DNA電泳)了解一下
                    點擊次數:23 發布時間:2022-03-08

                     (一)DNA的凝膠電泳:凝膠電泳是分子克隆的中心技術之一。

                    瓊脂糖凝膠用于分離大于200~1000bp的片段;操作簡單、快速,且分離范圍廣,分辨率高。

                    2.聚丙烯酰胺凝膠用于分離5-500bp的片段; 效果好、分辨率極高,相差1bp的DNA/片斷就能分開,能容納相對大量的DNA ,用于核苷酸多態性的分析。

                    瓊脂糖凝膠電泳的基本過程

                    材料:電泳緩沖液(常用TAE或TBE)、電泳級瓊脂糖、溴化乙錠溶液(核酸顯示劑)、加樣緩沖液(保證核酸不在加樣孔中擴散和用于電泳時間的指示系統)、水平凝膠電泳裝置及制膠系統、直流電源系統。

                    基本過程:制膠→放入電泳槽中并加入電泳緩沖液→取出梳子→將適量的核酸樣品和上樣緩沖液混合并上樣于加樣孔中→一定電壓條件下電泳→合適的時間后停止電泳→取出凝膠進行溴化乙錠染色→凝膠成像系統紫外燈下觀察并照相保存結果

                    注意:溴化乙錠具有致癌性,操作時要帶手套;不同濃度瓊脂糖的凝膠分離范圍;影響DNA在凝膠中遷移速率的因素:1、DNA分子的大??;2、構象;3、凝膠濃度;4、電壓;5、緩沖液

                     

                     

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                    特殊的凝膠電泳

                    1、倒轉電場凝膠電泳(FIGE):用于分離分子量10~2000kb的DNA分子;

                    2、鉗位均勻電場電泳(CHEF電泳):可分離大于107bp的DNA分子。

                    (二)RNA 電 泳

                    基本過程同DNA電泳一樣,但應明確一點的是,因為RNA分子對RNA酶的作用非常敏感,因此必須用對RNA酶有抑制作用DEPC水來配置所有溶液,所有與RNA接觸的儀器和裝置都要嚴格處理以盡量減少RNA酶對樣品的降解;另外,因為RNA分子有二、三級結構可以影響其電泳結果,因此電泳時應在變性劑存在下進行,常用的變性劑為甲醛和戊二醛。

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