<dfn id="5tr1h"><delect id="5tr1h"><p id="5tr1h"></p></delect></dfn>

    <var id="5tr1h"><var id="5tr1h"><pre id="5tr1h"></pre></var></var>

      <sub id="5tr1h"><delect id="5tr1h"><ol id="5tr1h"></ol></delect></sub>

          <font id="5tr1h"></font><dfn id="5tr1h"></dfn><big id="5tr1h"><mark id="5tr1h"></mark></big>

          <sub id="5tr1h"></sub>

          <meter id="5tr1h"><delect id="5tr1h"><ol id="5tr1h"></ol></delect></meter>

            <menuitem id="5tr1h"></menuitem>
              <menuitem id="5tr1h"></menuitem>

                      <progress id="5tr1h"><font id="5tr1h"></font></progress>
                    <dfn id="5tr1h"><var id="5tr1h"><dl id="5tr1h"></dl></var></dfn>

                    <var id="5tr1h"><font id="5tr1h"><dl id="5tr1h"></dl></font></var><var id="5tr1h"></var>
                    <dfn id="5tr1h"><delect id="5tr1h"><dl id="5tr1h"></dl></delect></dfn>

                    <dfn id="5tr1h"><font id="5tr1h"><dl id="5tr1h"></dl></font></dfn>

                    <thead id="5tr1h"><cite id="5tr1h"><ruby id="5tr1h"></ruby></cite></thead>

                    <cite id="5tr1h"><mark id="5tr1h"><rp id="5tr1h"></rp></mark></cite>

                    上海遠慕生物科技有限公司

                    這三種生物技術常用實驗你還不會操作?
                    點擊次數:23 發布時間:2022-03-04

                    一、總RNA的提?。═rizol法提?。?br/>
                    在收集到生物材料之后,最好能即刻進行RNA制備工作。若需暫時儲存,則應以液氮將生物材料急速冷凍后,儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時,將儲存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞,不可以先行解凍,以避免RNase的作用。


                    1.  提取組織RNA時,每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對組織進行裂解;提取細胞RNA時,先離心沉淀細胞,每5-10 ╳106個細胞加1ml Trizol后,反復用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞;

                    2.  將上述組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘;

                    3.  在上述EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15秒,在室溫下(15℃~30℃)放置2~3分鐘后,12000g(2℃~8℃)離心15分鐘;

                    4.  取上層水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15℃~30℃)放置10分鐘,12000g(2℃~8℃)離心10分鐘;

                    5.  棄上清,按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇進行洗滌,渦旋混合,7500g(2℃~8℃)離心5分鐘,棄上清;

                    6.  讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥;

                    7.  用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

                    二、瓊脂糖核酸電泳

                    1.  用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈,放在制膠平板上,封閉模具邊緣,架好梳子;

                    2.  根據欲分離DNA 片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠:準確稱量瓊脂糖干粉,加入到配膠用的三角燒瓶內,定量加入電泳緩沖液(一般20~30 ml);

                    3.  放入到微波爐內加熱熔化。冷卻片刻,加入一滴熒光染料,輕輕旋轉以充分混勻凝膠溶液,倒入電泳槽中,待其凝固;

                    4.  室溫下30~45分鐘后凝膠完全凝結,小心拔出梳子,將凝膠安放在電泳槽內;

                    5.  向電泳槽中倒入電泳緩沖液,其量以沒過膠面1mm為宜,如樣品孔內有氣泡,應設法除去;

                    6.  在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液(loading buffer),混勻后,用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內;

                    7.  接通電源,紅色為正極,黑色為負極,切記DNA樣品由負極往正極泳動 (靠近加樣孔的一端為負)。一般60~100V電壓,電泳20~40min即可;

                    8.  根據指示劑泳動的位置,判斷是否終止電泳;

                    9.  電泳完畢,關上電源,在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置,并與核酸分子量標準Marker比較被擴增產物的大小。

                    瓊脂糖凝膠濃度  線形DNA的最佳分辨范圍(bp)

                    0.5%   1,000~30,000

                    0.7%   800~12,000

                    1.0%   500~10,000

                    1.2%   400~7,000

                    1.5%   200~3,000

                    2.0%   50~2,000

                    三、膠回收純化DNA

                    1.  瓊脂糖電泳,將特異電泳帶用刀切下放入到EP管中,稱瓊脂糖帶的重量;

                    2.  按照每100mg加400μl的量加入binding buffer,放入到EP管振蕩器中,45℃~55℃溫育振蕩,直到所有的瓊脂糖都溶解(大概要5分鐘);

                    3.  取出純化柱,將上述溶解液轉移至柱中,室溫下放置2分鐘,8,000rpm 離心1分鐘,棄EP管中的液體,將純化柱放回EP管中;

                    4.  加500μl的wash buffer至柱中,8,000rpm 離心1分鐘。棄管中的溶液;

                    5.  重復操作4步的操作1次,最后將純化柱放入EP管中10,000rpm離心30秒,除去痕量的wash buffer;

                    6.  將純化柱放入一個新的EP管。加30~40μl H2O或者elution buffer至純化柱膜的中央,在37℃或50℃下放置2分鐘,10,000rpm離心1分鐘洗脫DNA,將EP管中的DNA溶液放在-20℃保存。

                    7.  注:若想要不電泳而直接純化DNA溶液,只需要在第2步中按100μl液量加400μl的binding buffer,其余的步驟不變。

                    上海遠慕生物科技有限公司 版權所有 地址:上海市嘉定區曹安公路5588號 郵編:201202 電話:021-58993001 管理登陸
                    傳真:021-50760790 手機:15121072253 聯系人:王宇豪 郵箱:yuanmusw@163.com  GoogleSitemap 網址:www.tyzst.com ICP備案號:滬ICP備14029423號-1
                    主營:ELISA試劑盒/染色液/溶液 /動物血清/標準品/化學試劑
                    點擊這里給我發消息
                    手機:15121072253
                    小太正白袜飞机gv免费网址_免费观看女同av网站_热99re久久国免费超精品首页_清纯白丝jk校花被调教av